| E-选择素调控白细胞跨内皮迁移转运中内皮细胞骨架重组动力学 |
| 英文题名 | E -selectin mediates PMN transmigration by regulating endothelial cytoskeleton remodeling
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| 黄丹丹
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| 导师 | 章燕
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| 2017
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| 学位授予单位 | 中国科学院大学
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| 学位授予地点 | 北京
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| 学位类别 | 硕士
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| 学位专业 | 一般力学与力学基础
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| 摘要 | 动脉粥样硬化发展通常是由慢性血管炎症导致的。炎症反应过程中，血液里的白细胞穿过血管内皮细胞达到炎症部分，发生募集。这个过程会引起白细胞和内皮细胞细胞骨架重组，鉴于动脉粥样硬化和高血压病人的脉管系统刚度增加，而斑块能增加中性粒和单核细胞的渗出，并通过细胞粘附分子调控内皮细胞微丝骨架网络动态重组，阐明内皮细胞微丝骨架调控的关键分子及信号调控机制对于认识血流下白细胞调控内皮细胞骨架重组、进而影响血管重构具有非常重要的生理意义。前期研究表明内皮细胞上E-选择素高表达能促进白细胞更快、更多、更有方向性地迁移，且在白细胞迁移处伴随内皮细胞骨架重组，提示E-选择素存在某种通过调控内皮细胞骨架重组来调节白细胞迁移的特殊机制。 因此，本文以血管稳态及重建为切入点，着眼于动脉粥样硬化中内皮细胞微丝骨架动态重组对中性粒细胞跨膜迁移的影响，采用生物力学和活细胞成像相结合的技术方法，重点关注E-选择素（E-selectin）通过调控微丝骨架网络的动态重组调控内皮细胞低阻抗区的形成，从而导致白细胞形成更快、更多、行程更短的跨膜迁移的信号调控网络和关键分子。主要研究内容包括： 采用逆转录病毒将Lifeact-GFP 转入人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell, HUVEC）细胞，用LPS刺激HUVEC 4小时以使E-selectin高表达。采用荧光显微镜，观测在白细胞跨内皮迁移过程中内皮细胞骨架的动态重组。发现白细胞迁移过程中，内皮细胞骨架进行快速动态重组，在白细胞周围形成孔洞来引导白细胞迁移，并随白细胞迁移结束孔洞愈合。量化孔洞生成的过程，统计孔洞面积随时间的变化，可以表征细胞骨架重组能力。采用激光共聚焦显微镜用荧光漂白后恢复（Fluorescence Recovery After Photobleaching , FRAP）技术观察E-selectin配体交联条件下，HUVEC内Lifeact-GFP的重组的动态过程，量化了HUVECs细胞上不同区域（胞体、裙边、EC交界处）Lifeact-GFP重组的动力学。结果显示内皮细胞胞体的骨架被破坏后恢复速度明显高于裙边和胞间连接处，这解释了白细胞为什么趋向于进行旁细胞而非穿细胞迁移。 采用干扰RNA对内皮细胞HUVECs的E-selectin进行干扰，实时动态记录E-selectin干扰对PMN跨膜迁移的影响，发现E-selectin干扰增加了白细胞跨膜迁移。进一步采用破坏内皮细胞骨架的cytochalasin D、Src激酶抑制剂PP1等小分子抑制剂处理E-选择素干扰的内皮细胞，研究了E-selectin调控细胞骨架动态重组的分子机制。结果显示E-选择素通过Src信号通路调控微丝蛋白重组从而影响白细胞跨内皮迁移。 本研究对于从细胞分子水平深入了解心血管活动和疾病（特别是动脉粥样硬化）发生的本质，寻找动脉粥样硬化中导致PMN过度募集的潜在药物靶标具有重要的科学意义和潜在的应用前景。 |
| 索取号 | Mas2017-011
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| 语种 | 中文
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| 文献类型 | 学位论文
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| 条目标识符 | http://dspace.imech.ac.cn/handle/311007/60394
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| 专题 | 微重力重点实验室
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推荐引用方式
GB/T 7714 |
黄丹丹. E-选择素调控白细胞跨内皮迁移转运中内皮细胞骨架重组动力学[D]. 北京. 中国科学院大学,2017.
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